Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nix Double Nickase Plasmid (h): sc-401982-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nix Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nix Double-Nickase-Plasmid (h) und Nix Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BNIP3L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nix: sc-166332
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nix Double Nickase Plasmid (h) | sc-401982-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nix Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401982-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BNIP3L kodiert Nix, ein BH3-only-Protein der äußeren Mitochondrienmembran, das Hypoxie- und zelluläre Stresssignale mit dem programmieren mitochondrialen Turnover verknüpft. Nix fördert die selektive Autophagie von Mitochondrien über LC3-interagierende Regionen und kooperiert mit PINK1/Parkin-unabhängigen Mitophagieprogrammen, wodurch es die mitochondriale Qualitätskontrolle während Differenzierung und Stressanpassung unterstützt. Über die Regulation des mitochondrialen Membranpotentials, der ROS-Homöostase und Interaktionen mit Proteinen der BCL2-Familie beeinflusst Nix die intrinsische Apoptose und das metabolische Remodeling. Eine fehlregulierte BNIP3L/Nix-Aktivität wurde mit veränderter Mitophagie und Entscheidungen über das Zellschicksal in Zusammenhängen wie Neurodegeneration, kardiometabolischem Stress und der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung mitochondrialer Überwachungswege macht.
Nix Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BNIP3L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BNIP3L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BNIP3L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BNIP3L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.