Plásmido CRISPR de Activación (h) NIS: sc-402298-ACT

SLC5A5 codifica el simportador sodio/yoduro (NIS), un transportador de la membrana plasmática que acopla la captación de yoduro al gradiente electroquímico de sodio para concentrar yoduro dentro de las células. La actividad de NIS sostiene procesos biosintéticos dependientes de yoduro e influye en el equilibrio redox celular; su regulación está vinculada al estado de diferenciación y a programas de control transcripcional que gobiernan la expresión de transportadores de membrana. Se han descrito alteraciones en la expresión de SLC5A5 y su mala localización tanto en contextos tiroideos como no tiroideos, donde una gestión alterada del yoduro puede servir como lectura funcional de la identidad de linaje y del tráfico de transportadores. Estas características hacen de NIS un modelo útil para estudiar la biología de los transportadores de la familia SLC, la maduración de proteínas de membrana y los mecanismos transcripcionales que controlan la especialización epitelial.

NIS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC5A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NIS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC5A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC5A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NIS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC5A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NIS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NIS en células tumorales con expresión de SLC5A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.