NIP30 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404757-ACT

FAM192A kodiert NIP30, ein konserviertes menschliches Protein, das über Protein-Protein-Interaktionen in chromatinassoziierten Komplexen an der Regulation der nukleären Organisation und von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist. Obwohl seine molekularen Funktionen noch weiter präzisiert werden, deutet die verfügbare Evidenz darauf hin, dass NIP30 mit der Transkriptionskontrolle sowie mit RNA-assoziierten Prozessen verknüpft ist, die Zellzustandsübergänge und stressadaptive Signalgebung beeinflussen. Störungen dieser regulatorischen Ebenen können Proliferations-, Differenzierungs- und Überlebenswege beeinträchtigen, wodurch NIP30 für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und bei anderen Erkrankungen mit dysregulierter transkriptioneller Homöostase von Interesse ist. Zudem stellt NIP30 einen nützlichen Knotenpunkt dar, um mithilfe funktioneller Genomik upstream-Regulatoren und nachgeschaltete Transkriptionsnetzwerke zu kartieren.

NIP30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FAM192A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NIP30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FAM192A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FAM192A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NIP30-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FAM192A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NIP30-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NIP30-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FAM192A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.