Plasmide CRISPR d'Activation (h) NIK: sc-400620-ACT

MAP3K14 code la kinase induisant NF‑κB (NIK), une MAP3K centrale qui active la voie NF‑κB non canonique en favorisant, de manière dépendante d’IKKα, la maturation de p100 (NFKB2) en p52 et en régulant les programmes transcriptionnels de RELB. NIK intègre les signaux en aval de récepteurs tels que BAFFR, CD40, LTβR et RANK afin de contrôler l’organogenèse des tissus lymphoïdes, la maturation des lymphocytes B, la différenciation des ostéoclastes et l’expression de gènes inflammatoires. Une régulation stricte de la stabilité de NIK et de l’amplitude de son signal est essentielle à l’homéostasie immunitaire, et une activité dérégulée de MAP3K14 a été associée à des altérations de la signalisation NF‑κB dans des troubles immunologiques et inflammatoires, ainsi que dans des contextes d’hémopathies malignes. En tant que nœud de signalisation, NIK est fréquemment étudiée pour cartographier le couplage récepteur‑transcription, les interactions entre voies (crosstalk) et les réponses adaptatives au stress.

NIK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP3K14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NIK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP3K14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP3K14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NIK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP3K14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NIK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NIK dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP3K14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.