Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Plasmide Double Nickase (h): sc-403321-NIC

CHRNG codifica la subunità gamma del recettore nicotinico dell’acetilcolina (nAChR) di tipo muscolare, un canale ionico ligando‑dipendente che media la rapida trasmissione sinaptica alla giunzione neuromuscolare. Durante lo sviluppo fetale e perinatale, il recettore contenente la subunità gamma contribuisce alla depolarizzazione di membrana dipendente dall’acetilcolina, al flusso di cationi e all’accoppiamento eccitazione–contrazione, sostenendo la maturazione muscolare e l’innervazione motoria. La funzione di CHRNG si integra con la segnalazione colinergica, l’organizzazione della membrana postsinaptica e i programmi di differenziazione delle miofibre dipendenti dall’attività. Varianti genetiche o deregolazione di CHRNG sono state associate a disturbi neuromuscolari congeniti caratterizzati da ridotta motilità fetale e da un’anomala formazione della giunzione neuromuscolare, rendendolo un bersaglio utile per lo studio della sinaptogenesi dello sviluppo e dell’assemblaggio del canale.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.