Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double Nickaseプラスミド (h): sc-403321-NIC

CHRNG は、筋型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のガンマサブユニットをコードしており、この受容体は神経筋接合部における速いシナプス伝達を担うリガンド作動性イオンチャネルです。胎児期および周産期の発達過程では、ガンマサブユニットを含む受容体が、アセチルコリン依存的な膜脱分極、陽イオンフラックス、ならびに興奮収縮連関に寄与し、筋の成熟と運動神経支配を支えます。CHRNG の機能は、コリン作動性シグナル伝達、シナプス後膜の構築、そして活動依存的な筋線維分化プログラムと統合的に結び付いています。CHRNG の遺伝的変異や発現制御の破綻は、胎児期の運動低下や神経筋接合部形成異常を特徴とする先天性神経筋疾患と関連しており、発生期のシナプス形成（シナプトジェネシス）やチャネル組み立ての研究における有用な標的となっています。

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。