Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418961

Übersicht

Chrng kodiert die Gamma-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines ligandengesteuerten Kationenkanals, der sich zusammen mit anderen nAChR-Untereinheiten des Muskeltyps assembliert und an der neuromuskulären Endplatte die acetylcholinabhängige Depolarisation vermittelt. In der Mausentwicklung ist CHRNG ein zentraler Bestandteil des fetalen Rezeptorkomplexes und unterstützt die Synaptogenese, die aktivitätsabhängige Reifung der Skelettmuskulatur sowie die Kontrolle der Erregbarkeit durch schnellen Ionenfluss und nachgeschaltete, Ca2+-gekoppelte Signalwege. Eine veränderte CHRNG-Expression oder Untereinheitenzusammensetzung kann die neuromuskuläre Signalübertragung und Programme der Muskelfaser-Differenzierung stören und bietet damit einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung angeborener und entwicklungsbedingter neuromuskulärer Phänotypen. Dieses Gen ist daher relevant für Signalwege, die die Bildung der motorischen Endplatte, die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und das zeitliche Programm der Muskelentwicklung steuern.

Das Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chrng-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chrng-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chrng nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chrng-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chrng-Exone abzielen, die für die Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chrng-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chrng-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG HDR-Plasmid (m) und Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chrng-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chrng-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.