Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double Nickaseプラスミド (h): sc-404780-NIC

CHRNEは、筋型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のεサブユニットをコードしている。この受容体はリガンド作動性の陽イオンチャネルであり、神経筋接合部における高速なシナプス伝達に必須である。成人型nAChR五量体にεサブユニットが組み込まれることで、アセチルコリン依存的なチャネル開口、ナトリウム流入、ならびに興奮—収縮連関を開始する終板の脱分極が支えられる。CHRNEの機能は、アグリン—LRP4—MuSKシグナル伝達、アセチルコリンエステラーゼによる神経伝達物質の除去調節、そしてシナプス後膜における活動依存的な受容体クラスター形成とターンオーバーと統合的に関与する。病的なCHRNE変異は、神経筋伝達の障害や受容体発現量またはゲーティング動態の変化を特徴とする先天性筋無力症候群と関連している。

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。