Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418960

Descripción general

Chrne codifica la subunidad épsilon del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal iónico regulado por ligando concentrado en la membrana postsináptica de la unión neuromuscular. La incorporación de CHRNE al receptor maduro sostiene la transmisión sináptica al permitir la entrada de cationes evocada por la acetilcolina, lo que despolariza la placa motora y desencadena el acoplamiento excitación–contracción. La función de CHRNE está estrechamente vinculada a la maduración y el mantenimiento de la sinapsis mediante vías que regulan el agrupamiento de receptores, la arquitectura de la placa motora y la señalización dependiente de la actividad. La alteración de CHRNE se asocia con síndromes miasténicos congénitos y otros defectos de la transmisión neuromuscular, por lo que es relevante para estudios mecanísticos de la función motora y de las sinaptopatías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chrne en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chrne junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chrne tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chrne para la investigación de la señalización de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chrne críticos para la función de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chrne para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chrne. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m) y el plásmido HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chrne para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chrne definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.