Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418960

Übersicht

Chrne kodiert die Epsilon-Untereinheit des muskeltypischen nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines ligandengesteuerten Ionenkanals, der an der postsynaptischen Membran der neuromuskulären Endplatte konzentriert ist. Der Einbau von CHRNE in den reifen Rezeptor unterstützt die synaptische Übertragung, indem er einen durch Acetylcholin ausgelösten Kationeneinstrom ermöglicht, der die Muskelendplatte depolarisiert und die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung auslöst. Die Funktion von CHRNE ist eng mit der Reifung und Aufrechterhaltung der Synapse verknüpft, über Signalwege, die Rezeptorclusterung, die Architektur der Endplatte und aktivitätsabhängige Signalübertragung steuern. Störungen von CHRNE sind mit kongenitalen myasthenen Syndromen und verwandten Defekten der neuromuskulären Übertragung assoziiert und sind daher relevant für mechanistische Studien der Motorik und von Synaptopathien.

Das Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chrne-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chrne-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chrne nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chrne-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chrne-Exone abzielen, die für die Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chrne-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chrne-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE HDR-Plasmid (m) und Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chrne-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chrne-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.