Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double Nickase Plasmid (h): sc-404001-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double-Nickase-Plasmid (h) und Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRND abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND: sc-390896
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double Nickase Plasmid (h) | sc-404001-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404001-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRND kodiert die Delta-Untereinheit des muskeltypischen nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines pentameren, ligandengesteuerten Kationenkanals, der an der postsynaptischen Membran der neuromuskulären Endplatte konzentriert ist. Nach Bindung von Acetylcholin öffnet sich der Rezeptor und ermöglicht den Fluss von Na⁺ und K⁺, was die Depolarisation der Endplatte auslöst und die synaptische Übertragung mit der Kontraktion der Skelettmuskulatur koppelt. Die Funktion von CHRND ist in Signalwege integriert, die den Aufbau und die Reifung der Synapse steuern, darunter die Agrin–LRP4–MuSK-Signalkaskade, die Rezeptorclusterung sowie die Stabilisierung durch Rapsyn und zugehörige Gerüstproteine. Genetische Veränderungen muskulärer nAChR-Untereinheiten, einschließlich CHRND, sind mit Störungen der neuromuskulären Übertragung wie kongenitalen myasthenischen Syndromen verbunden und machen dieses Gen relevant für mechanistische Studien zur synaptischen Erregbarkeit und zur Rezeptorbiogenese.
Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRND-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRND abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRND-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRND-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.