Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND: sc-404001-NIC

CHRND code la sous-unité delta du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal cationique pentamérique activé par un ligand, concentré au niveau de la membrane postsynaptique de la jonction neuromusculaire. Lors de la liaison de l’acétylcholine, le récepteur s’ouvre et permet le flux de Na⁺ et de K⁺, entraînant la dépolarisation de la plaque motrice et assurant le couplage entre la transmission synaptique et la contraction du muscle squelettique. La fonction de CHRND s’intègre à des voies qui régissent l’assemblage et la maturation de la synapse, notamment la signalisation agrine–LRP4–MuSK, le regroupement des récepteurs et leur stabilisation par la rapsyne et des échafaudages associés. Des perturbations génétiques des sous-unités du nAChR musculaire, dont CHRND, sont associées à des troubles de la transmission neuromusculaire tels que les syndromes myasthéniques congénitaux, ce qui fait de ce gène une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’excitabilité synaptique et de la biogenèse des récepteurs.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRND dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRND. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRND. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRND.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.