Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1: sc-404205-ACT

CHRNB1 codifica la subunidad β1 del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal iónico activado por ligando que se ensambla con las subunidades α, δ y ε/γ para mediar la transmisión sináptica rápida en la unión neuromuscular. Tras la unión de la acetilcolina, el receptor se abre y permite el flujo de cationes, conectando la señalización colinérgica con la despolarización de membrana, el acoplamiento excitación–contracción y la remodelación dependiente de la actividad de la arquitectura postsináptica. La función de CHRNB1 se integra con la señalización agrina–LRP4–MuSK y con la depuración sináptica regulada por la acetilcolinesterasa, que en conjunto mantienen la estabilidad de la placa motora y la excitabilidad muscular. Las alteraciones genéticas o autoinmunes que afectan la integridad del nAChR se asocian con síndromes miasténicos congénitos y con mecanismos relacionados con la miastenia gravis, lo que convierte a CHRNB1 en un objetivo clave para estudiar defectos de la transmisión neuromuscular y la biología del ensamblaje del receptor.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 en células tumorales con expresión de CHRNB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.