Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9: sc-402753-NIC

CHRNA9 code la sous-unité α9 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine, un canal cationique activé par ligand qui forme des récepteurs fonctionnels (souvent avec α10) afin de coupler les signaux cholinergiques à la dépolarisation membranaire et à une signalisation dépendante du Ca²⁺. Dans les tissus humains, les nAChR contenant α9 régulent l’excitabilité et la dynamique du calcium intracellulaire, influençant des voies en aval telles que MAPK/ERK et d’autres programmes transcriptionnels dépendants de l’activité. L’expression de CHRNA9 a été étudiée dans des contextes sensoriels et épithéliaux, notamment la physiologie des cellules ciliées auditives, ainsi que dans des réseaux plus larges de signalisation cholinergique liés à la communication cellulaire et aux réponses au stress. Des altérations de la régulation de CHRNA9 ont été rapportées dans divers cadres de recherche orientés vers les maladies, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique pour analyser la biologie des canaux ioniques cholinergiques dans des systèmes modèles humains.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.