Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402753-ACT

CHRNA9は、ニコチン性アセチルコリン受容体α9サブユニットをコードしており、リガンド作動性イオンチャネルを構成する要素の一つです。CHRNA10と組み合わさって機能的な受容体を形成することが多く、コリン作動性シグナル伝達と、形質膜を介した迅速な陽イオンフラックスを仲介します。アセチルコリン依存的なチャネル開口を通じて、CHRNA9は膜興奮性、カルシウム依存性シグナル伝達カスケード、ならびに細胞間コミュニケーションを形作る下流の転写プログラムに影響を与えます。非神経系の文脈においても、ニコチン性受容体シグナルは増殖、分化、炎症性シグナルの制御と関連づけられており、CHRNA9は刺激に連動したイオンチャネル経路を研究するうえで有用なノードとなります。CHRNA9の発現やシグナルの変化は、感覚生物学やがん関連の細胞挙動で報告されている疾患関連フェノタイプと関連しており、機序解明モデルでの検討を後押しします。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHRNA9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHRNA9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHRNA9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHRNA9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHRNA9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。