Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416614-ACT

CHRNA7 kodiert die α7‑Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors, eines homopentameren, ligandengesteuerten Kationenkanals, der als Reaktion auf cholinerge Signalgebung einen schnellen Ca²⁺‑Einstrom vermittelt. In Neuronen und Immunzellen beeinflusst die Aktivität des α7‑nAChR die Membranerregbarkeit sowie calciumabhängige Signalkaskaden, die synaptische Plastizität, Neurotransmitterfreisetzung und Transkriptionsprogramme im Zusammenhang mit dem cholinergen antiinflammatorischen Signalweg prägen. Die durch CHRNA7 regulierte Calciumsignalgebung greift in MAPK/ERK‑, JAK/STAT‑ und NF‑κB‑assoziierte Prozesse ein und beeinflusst dadurch die Zytokinproduktion und zelluläre Stressantworten. Genetische Variation und veränderte Expression von CHRNA7 wurden mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird eine dysregulierte cholinerge Signalgebung auch im Kontext von Entzündung und Neurodegeneration untersucht.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNA7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNA7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNA7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNA7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNA7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.