Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401582-NIC

CHRNA3 kodiert die α3‑Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors, einen zentralen Bestandteil ligandengesteuerter Kationenkanäle, die eine schnelle cholinerge Neurotransmission vermitteln. Nach Bindung von Acetylcholin oder Nikotin regulieren CHRNA3-haltige Rezeptoren die Membrandepolarisation und den Ca²⁺-Einstrom und koppeln dies an intrazelluläre Signalwege, die Erregbarkeit, synaptische Übertragung und neuroendokrine Sekretion beeinflussen. In menschlichen Geweben ist CHRNA3 besonders in autonomen Ganglien ausgeprägt und trägt zu Signalwegen bei, die die Herz‑Kreislauf‑, Magen‑Darm‑ und Atemfunktion steuern. Genetische Varianten und eine fehlregulierte Expression im CHRNA3‑Lokus wurden mit Nikotinabhängigkeit und einer erhöhten Anfälligkeit für rauchbedingte Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Eignung für mechanistische Studien zur cholinergen Signalübertragung und zur Suchtbiologie unterstreicht.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNA3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.