Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403376-NIC

CHRNA2 kodiert die α2‑Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs), ligandengesteuerter Kationenkanäle, die sich als heteropentamere Komplexe zusammensetzen und eine schnelle cholinerge Neurotransmission vermitteln. Nach Bindung von Acetylcholin oder nikotinischen Agonisten erhöhen α2‑haltige nAChRs den Na⁺‑ und Ca²⁺‑Einstrom und prägen so die Membranerregbarkeit sowie aktivitätsabhängige Signalwege, die mit Ca²⁺‑regulierten Transkriptionsprogrammen und synaptischer Plastizität verknüpft sind. Die Expression von CHRNA2 trägt zur Modulation neuronaler Schaltkreise im zentralen Nervensystem bei und beeinflusst Prozesse wie Wachheit, Aufmerksamkeit und belohnungsbezogene Signalübertragung. Genetische Variation und eine dysregulierte nAChR‑Funktion wurden mit neuropsychiatrischen Phänotypen und substanzkonsumbezogenen Merkmalen in Verbindung gebracht, wodurch CHRNA2 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Störungen cholinerger Signalwege darstellt.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNA2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNA2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNA2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNA2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.