Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1: sc-401880-ACT

CHRNA1 code la sous-unité α1 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine de type musculaire, un canal cationique activé par ligand qui déclenche une dépolarisation rapide à la jonction neuromusculaire en réponse à l’acétylcholine. En tant que composant du complexe récepteur pentamérique, CHRNA1 contribue à l’ouverture/fermeture du canal, à la sélectivité ionique et à la transmission synaptique qui couple l’activité du motoneurone à la contraction du muscle squelettique. Ce récepteur intervient dans les voies de signalisation cholinergique et de couplage excitation–contraction, en influençant l’excitabilité membranaire et les processus en aval dépendants du calcium. Une dérégulation ou des variants pathogènes de CHRNA1 sont associés aux syndromes myasthéniques congénitaux et à d’autres défauts de transmission neuromusculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biogenèse des récepteurs, du maintien synaptique et des canalopathies.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.