Plasmide Double Nickase (m) NHERF-1: sc-424152-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NHERF-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NHERF-1 Double Nickase (m) et le plasmide NHERF-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc9a3r1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NHERF-1 Antibody (A-7): sc-271552
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NHERF-1 | sc-424152-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc9a3r1 code pour NHERF-1, une protéine échafaudage contenant un domaine PDZ, qui organise des complexes de signalisation membranaires et relie des transporteurs et des récepteurs au cytosquelette d’actine. Dans les cellules de souris, NHERF-1 coordonne des processus tels que le transport ionique et le trafic des récepteurs en interagissant avec des protéines, notamment les échangeurs Na⁺/H⁺, les RCPG et les récepteurs à activité tyrosine kinase, influençant ainsi des voies en aval qui contrôlent la polarité épithéliale et l’intégration des signaux. Grâce à ces fonctions d’échafaudage, NHERF-1 contribue à réguler la dynamique de la signalisation des phosphoinositides et le remodelage du cytosquelette à la membrane plasmique. Dans la littérature, la dérégulation des complexes dépendants de NHERF-1 a été associée à des altérations de l’homéostasie épithéliale et des programmes de signalisation pertinents pour la physiologie rénale et gastro-intestinale, ainsi qu’à la modulation de voies oncogéniques dans des systèmes modèles.
NHERF-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc9a3r1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc9a3r1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc9a3r1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc9a3r1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.