NGF Double Nickase Plasmid (h): sc-400292-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NGF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NGF Double-Nickase-Plasmid (h) und NGF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NGF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NGF: sc-518166
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NGF Double Nickase Plasmid (h) | sc-400292-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NGF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400292-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der Nervenwachstumsfaktor (NGF) ist ein sezerniertes Neurotrophin, das an die Rezeptor-Tyrosinkinase TrkA (NTRK1) sowie an den p75-Neurotrophinrezeptor (NGFR) bindet und dadurch neuronales Überleben, Differenzierung und Neuritenauswuchs reguliert. Die NGF-Signalübertragung aktiviert MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ-Signalwege und koordiniert dabei Transkriptionsprogramme, Zytoskelettdynamik und den Erhalt synaptischer Strukturen sowohl im peripheren als auch im zentralen Nervensystem. Über die Neuroentwicklung hinaus trägt NGF zur neuroimmunologischen Kommunikation bei und kann über rezeptorabhängige Signalgebung die Sensibilisierung von Nozizeptoren sowie entzündliche Reaktionen modulieren. Eine dysregulierte NGF-Expression oder -Signalübertragung wird mit neurodegenerativen Prozessen, Mechanismen chronischer Schmerzen und veränderter neuronaler Plastizität in Verbindung gebracht, weshalb NGF ein intensiv untersuchter Knotenpunkt der Neurobiologie ist.
NGF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NGF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NGF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NGF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NGF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.