Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFXL1 (h): sc-407389

Présentation

NFXL1 code un régulateur transcriptionnel contenant des doigts de zinc, impliqué dans le contrôle de programmes d’expression génique liés à la différenciation cellulaire et à la signalisation sensible au stress. En tant que facteur putatif de liaison à l’ADN, NFXL1 devrait influencer des réseaux transcriptionnels qui façonnent des processus épithéliaux et immunitaires, notamment des voies régissant le niveau basal de l’inflammation et la fonction de barrière. Des études génétiques et fonctionnelles chez l’humain ont associé NFXL1 à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de la régulation génique dans le contexte du développement cérébral et des fonctions cognitives. L’analyse des sorties transcriptionnelles dépendantes de NFXL1 peut aider à préciser les cibles en aval et les interactions entre voies de signalisation qui contribuent à des états d’expression complexes associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFXL1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NFXL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NFXL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NFXL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFXL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NFXL1 pour l'étude de la signalisation de NFXL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NFXL1 essentiels à la fonction de NFXL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NFXL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NFXL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NFXL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NFXL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NFXL1 plasmide HDR (h) et le NFXL1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NFXL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NFXL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.