NFKBIA/IkB alpha Lentiviral Activation Particles (h): sc-400034-LAC

NFKBIA kodiert IκBα, einen zentralen hemmenden Regulator der NF-κB-Signalübertragung, der RELA/p50-Komplexe im Zytoplasma bindet und deren Translokation in den Zellkern begrenzt. Nach entzündungs- oder stressinduzierter Aktivierung des IKK-Komplexes wird IκBα phosphoryliert, ubiquitinyliert und abgebaut, was die schnelle Transkription von NF-κB-Zielgenen ermöglicht, die an der Zytokinproduktion, der angeborenen Immunität, der Apoptose und dem Zellüberleben beteiligt sind. NFKBIA ist zudem ein direktes Transkriptionsziel von NF-κB und bildet eine negative Rückkopplungsschleife, die Signalstärke und -dauer mitbestimmt. Eine dysregulierte Kontrolle von IκBα wird mit chronischen Entzündungen und onkogener NF-κB-Aktivität in Verbindung gebracht, wodurch NFKBIA einen häufig untersuchten Knotenpunkt in der Immun-Signalgebung, der Tumorbiologie und der Regulation von Zellschicksalsentscheidungen darstellt.

NFKBIA/IkB alpha Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NFKBIA-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NFKBIA/IkB alpha Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NFKBIA-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NFKBIA/IkB alpha-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NFKBIA-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.