NFKBIA/IkB alpha Double Nickase Plasmid (h): sc-400034-NIC

NFKBIA kodiert IκBα, einen zentralen inhibitorischen Regulator der kanonischen NF‑κB-Signalübertragung, der an RELA/p50-Komplexe bindet und sie im Zytoplasma zurückhält, bis eine IKK‑vermittelte Phosphorylierung die Ubiquitinierung und den proteasomalen Abbau auslöst. Über diesen durch Rückkopplung kontrollierten Mechanismus moduliert IκBα stimulusabhängige Transkriptionsprogramme, die Entzündung, angeborene und adaptive Immunität, Zellüberleben und Stressantworten steuern. Eine fehlregulierte Aktivität oder Expression von NFKBIA wurde mit der aberranten Aktivierung des NF‑κB‑Signalwegs in immunvermittelten Erkrankungen und in zahlreichen Krebs-Kontexten in Verbindung gebracht, wo veränderte Signalübertragung Zytokinnetzwerke, Apoptoseresistenz und Signale aus dem Mikromilieu beeinflussen kann. Als zentraler Knotenpunkt in TNF‑, IL‑1‑, TLR‑ und Antigenrezeptor‑Signalwegen wird NFKBIA häufig untersucht, um die NF‑κB‑Dynamik, transkriptionelle Rückkopplung und Signalweg‑Cross‑Talk zu analysieren.

NFKBIA/IkB alpha Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFKBIA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFKBIA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFKBIA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFKBIA-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.