NFκB p52/p100/NFKB2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400418-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NFκB p52/p100/NFKB2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NFκB p52/p100/NFKB2 Double-Nickase-Plasmid (h) und NFκB p52/p100/NFKB2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFKB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NFκB p52/p100/NFKB2: sc-7386
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NFκB p52/p100/NFKB2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400418-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFκB p52/p100/NFKB2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400418-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFKB2 kodiert den NFκB‑p100‑Vorläufer, der zur p52‑Untereinheit prozessiert wird – einem zentralen transkriptionellen Regulator im nichtkanonischen NF‑κB‑Signalweg. Über die regulierte p100‑Prozessierung nachgeschaltet an Rezeptoren wie BAFFR, CD40 und LTβR steuert NFKB2 die B‑Zell‑Reifung, die Lymphorganogenese, die Zytokinsignalgebung sowie Überlebensprogramme. Seine Aktivität ist in die IKKα‑NIK‑Signalgebung integriert, wirkt mit RelB‑haltigen Dimeren zusammen und steht über Crosstalk mit kanonischen NF‑κB‑Antworten in Wechselwirkung, wodurch Entzündungs‑ und Immungenexpression geprägt wird. Eine fehlregulierte NFKB2‑Signalgebung wurde mit Immunfunktionsstörungen und der Biologie lymphoider Malignome in Verbindung gebracht, weshalb sie häufig Ziel mechanistischer Studien zu Signaltransduktion, transkriptioneller Kontrolle und Zellschicksalsentscheidungen ist.
NFκB p52/p100/NFKB2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFKB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFKB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFKB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFKB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.