NFAT5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401359

Descripción general

NFAT5 (factor nuclear de células T activadas 5), también conocido como TonEBP, es un factor de transcripción de la familia Rel que coordina la adaptación celular al estrés hipertónico mediante la regulación de programas génicos osmoprotectores, incluidos transportadores y enzimas implicados en la acumulación de osmólitos compatibles. En contextos inmunitarios y epiteliales, NFAT5 influye en la producción de citocinas, la polarización de macrófagos y la función de los linfocitos, vinculando la detección osmótica con la señalización inflamatoria y las vías de supervivencia celular. La actividad de NFAT5 se entrecruza con redes de señalización dependientes de MAPK y de calcio, y ayuda a mantener la homeostasis proteica y el control del volumen celular bajo estrés. La desregulación de la señalización de NFAT5 se ha asociado con trastornos inflamatorios, la fisiología de la médula renal y respuestas al estrés del microambiente tumoral, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la adaptación al estrés y la regulación inmunitaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NFAT5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NFAT5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NFAT5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NFAT5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NFAT5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NFAT5 para la investigación de la señalización de NFAT5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NFAT5 críticos para la función de NFAT5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NFAT5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NFAT5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NFAT5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NFAT5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NFAT5 (h) y el plásmido HDR NFAT5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NFAT5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NFAT5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.