NFκB p50 Double Nickase Plasmid (h): sc-400087-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NFκB p50 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NFκB p50 Double-Nickase-Plasmid (h) und NFκB p50 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFKB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NFκB p50: sc-8414
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NFκB p50 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400087-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFκB p50 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400087-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFKB1 kodiert die NFκB‑Untereinheit p50, einen zentralen Bestandteil von NF‑κB‑Transkriptionsfaktorkomplexen, die die induzierbare Genexpression als Antwort auf entzündliche Zytokine, Toll‑like‑Rezeptor‑Signalgebung, Antigenrezeptor‑Aktivierung und zellulären Stress regulieren. NFκB p50 entsteht durch proteolytische Prozessierung des p105‑Vorläufers und bildet Homo‑ oder Heterodimere (häufig mit RelA/p65), die Transkriptionsprogramme steuern, welche angeborene und adaptive Immunität, Zellüberleben und Differenzierung kontrollieren. Über kanonische und nicht‑kanonische NF‑κB‑Signalwege beeinflusst p50 die Chromatinzugänglichkeit sowie Zytokin‑/Chemokin‑Netzwerke und prägt damit die Reaktionen auf Infektionen und Gewebeschädigung. Eine fehlregulierte NFKB1‑Aktivität und die Signalweg‑Wechselwirkungen mit MAPK‑, JAK/STAT‑ und Interferon‑Signalgebung werden häufig mit chronischer Entzündung, Immundysfunktion und onkogenen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht.
NFκB p50 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFKB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFKB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFKB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFKB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.