Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400677

Übersicht

ELANE kodiert die neutrophile Elastase, eine granulaassoziierte Serinprotease, die während der Degranulation neutrophiler Granulozyten und der NET-Bildung freigesetzt wird, um Proteine der extrazellulären Matrix zu spalten und mikrobielle Virulenzfaktoren zu inaktivieren. Ihre Aktivität ist in die angeborene Immun-Signalgebung, das Protease–Antiprotease-Gleichgewicht und entzündliche Kaskaden eingebettet, die die Rekrutierung von Leukozyten und die Gewebeumgestaltung prägen. Eine dysregulierte Funktion der neutrophilen Elastase trägt zu aberranter Proteolyse sowie oxidativem/entzündlichem Stress in den mikroenvironmentalen Bedingungen der Atemwege und des Gefäßsystems bei; zudem sind ELANE-Varianten mit Phänotypen kongenitaler Neutropenie mit beeinträchtigter myeloischer Reifung verknüpft. Daher wird ELANE breit in der Neutrophilenbiologie, in Wirt–Pathogen-Interaktionen und in Mechanismen untersucht, die die Granulopoese mit entzündlicher Gewebeschädigung koppeln.

Das Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ELANE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ELANE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ELANE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Neutrophil Elastase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ELANE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Neutrophil Elastase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ELANE-Exone abzielen, die für die Neutrophil Elastase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ELANE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ELANE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Neutrophil Elastase HDR-Plasmid (h) und Neutrophil Elastase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ELANE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ELANE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.