Neutrophil Elastase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400677-ACT

ELANE codifica a elastase de neutrófilos, uma protease serina armazenada em grânulos azurófilos que é liberada durante a degranulação e a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) para remodelar a matriz extracelular e degradar proteínas microbianas e do hospedeiro. Sua atividade contribui para a sinalização imune inata ao moldar gradientes de quimiocinas e modular mediadores inflamatórios, com regulação rigorosa por antiproteases endógenas para evitar lesão tecidual colateral. A expressão ou atividade desregulada da elastase de neutrófilos está implicada em dano tecidual inflamatório e em interações alteradas entre hospedeiro e patógeno, e variantes de ELANE têm sido associadas a fenótipos de neutropenia hereditária que afetam a granulopoiese. Como resultado, ELANE é frequentemente estudado em modelos de diferenciação mieloide, equilíbrio protease–antiprotease e patologia inflamatória.

Neutrophil Elastase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELANE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neutrophil Elastase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELANE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELANE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neutrophil Elastase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELANE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neutrophil Elastase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neutrophil Elastase em células tumorais com expressão de ELANE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.