Plásmido Doble Nickase (m) neuroserpin: sc-423113-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)neuroserpin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa neuroserpin (m) y el plásmido de doble nickasa neuroserpin (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Serpini1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: neuroserpin Anticuerpo (C-9): sc-48360
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) neuroserpin | sc-423113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) neuroserpin | sc-423113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Serpini1 del ratón codifica la neuroserpina, un inhibidor secretado de proteasas de serina que modula principalmente la actividad del activador tisular del plasminógeno (tPA/PLAT) en el sistema nervioso. Al restringir la proteólisis pericelular, la neuroserpina influye en la remodelación de la matriz extracelular, la plasticidad sináptica, el crecimiento de neuritas y las vías de señalización dependientes de la actividad vinculadas a la supervivencia neuronal y al refinamiento de los circuitos. Serpini1 también está implicado en la proteostasis celular, ya que el mal plegamiento o una expresión alterada pueden perturbar las respuestas al estrés del retículo endoplásmico (RE) y el control de calidad de proteínas. La desregulación del eje neuroserpina–tPA/plasmina se ha asociado con mecanismos neurodegenerativos y neuroinflamatorios, lo que convierte a Serpini1 en un objetivo relevante para estudiar las vías que acoplan la proteólisis con la función neuronal.
neuroserpin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Serpini1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Serpini1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Serpini1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Serpini1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.