Neuronatin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421919

Descripción general

El gen Nnat de ratón codifica neuronatina, una proteína pequeña e improntada, regulada durante el desarrollo, enriquecida en el sistema nervioso y en tejidos endocrinos. La neuronatina se localiza predominantemente en la membrana del retículo endoplásmico y se ha implicado en el control de la dinámica del calcio intracelular, la homeostasis del RE y el acoplamiento de señales metabólicas con decisiones sobre el estado celular. A través de sus efectos en la señalización dependiente de Ca2+ y en vías sensibles al estrés, la neuronatina se ha relacionado con la diferenciación neuronal, la función sináptica, la biología de los adipocitos y de las células β pancreáticas, y la regulación del balance energético. Se ha informado de una expresión desregulada de NNAT en contextos de disfunción metabólica, fenotipos del neurodesarrollo y programas celulares asociados a tumores, lo que convierte a Nnat en un nodo útil para estudios mecanísticos del desarrollo y de las respuestas celulares al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Neuronatin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nnat en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nnat junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nnat tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Neuronatin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nnat para la investigación de la señalización de Neuronatin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nnat críticos para la función de Neuronatin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nnat para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Neuronatin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Neuronatin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nnat. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Neuronatin (m) y el plásmido HDR Neuronatin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nnat para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nnat definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.