Plasmide CRISPR/Cas9 KO neuroligin 2 (h): sc-402250

Présentation

NLGN2 code la neuroligine 2, une molécule d’adhérence cellulaire postsynaptique enrichie au niveau des synapses inhibitrices, où elle se lie aux neurexines présynaptiques pour organiser la formation et la maturation des synapses. La neuroligine 2 sert d’échafaudage aux spécialisations postsynaptiques GABAergiques en coordonnant l’agrégation des récepteurs, la signalisation synaptique et l’organisation du cytosquelette, influençant l’équilibre excitation–inhibition et la synchronie des réseaux. Par son rôle dans la synaptogenèse et la plasticité synaptique, NLGN2 s’inscrit à l’interface de voies qui régulent la connectivité neuronale et la neurotransmission inhibitrice. Des altérations de la fonction ou de l’expression de NLGN2 ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques associés à une perturbation du développement des circuits inhibiteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO neuroligin 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NLGN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NLGN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NLGN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine neuroligin 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NLGN2 pour l'étude de la signalisation de neuroligin 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NLGN2 essentiels à la fonction de neuroligin 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NLGN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le neuroligin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le neuroligin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NLGN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le neuroligin 2 plasmide HDR (h) et le neuroligin 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NLGN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NLGN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.