neuroligin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401668-ACT

Humanes NLGN1 kodiert Neuroligin 1, ein postsynaptisches Zelladhäsionsprotein, das an präsynaptische Neurexine bindet, um die Bildung, Reifung und Stabilität exzitatorischer Synapsen zu organisieren. Neuroligin 1 dient als Gerüstprotein für synaptische Proteinkomplexe und trägt zur aktivitätsabhängigen synaptischen Plastizität bei, indem es die Rezeptorlokalisierung und nachgeschaltete Signalwege koordiniert, die die neuronale Konnektivität formen. Aufgrund seiner Rolle in der Synaptogenese und der Verfeinerung neuronaler Schaltkreise wird NLGN1 häufig in Signalwegen untersucht, die die glutamaterge Transmission und den synaptischen Umbau steuern. Veränderte Neuroligin–Neurexin-Signalgebung und eine Dysregulation von NLGN1 wurden im Zusammenhang mit Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Erkrankungen untersucht, einschließlich synaptischer Dysfunktionsphänotypen.

neuroligin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NLGN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

neuroligin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NLGN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NLGN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen neuroligin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NLGN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von neuroligin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des neuroligin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NLGN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.