Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neurogenin 3 (m): sc-419234

Présentation

Le gène murin **Neurog3** code le facteur de transcription à domaine hélice-boucle-hélice (bHLH) **Neurogenin 3**, déterminant majeur de la spécification de la lignée endocrine au cours du développement du pancréas et de l’intestin. Neurogenin 3 intègre des signaux développementaux, notamment la répression médiée par Notch/Hes et des cascades transcriptionnelles pro-endocrines, afin d’induire l’engagement des progéniteurs endocrines puis d’activer des programmes de différenciation. Son activité coordonne des réseaux de régulation génique qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire, la maturation et l’identité des cellules productrices d’hormones, faisant de **Neurog3** un nœud central pour l’étude du développement pancréatique et de la biologie des cellules endocrines. Une dysrégulation de la fonction de Neurog3 est pertinente dans des modèles de différenciation endocrine altérée et dans les mécanismes de maladies métaboliques impliquant la formation des îlots pancréatiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neurogenin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Neurog3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Neurog3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Neurog3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neurogenin 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Neurog3 pour l'étude de la signalisation de Neurogenin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Neurog3 essentiels à la fonction de Neurogenin 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Neurog3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neurogenin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Neurogenin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Neurog3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neurogenin 3 plasmide HDR (m) et le Neurogenin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Neurog3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Neurog3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.