Plásmido Doble Nickase (h) Neurofibromin 2/NF2/Merlin: sc-400504-NIC

NF2 codifica la neurofibromina 2 (Merlin), un adaptador membrana–citoesqueleto que integra señales procedentes de las uniones célula–célula y de la corteza de actina para restringir la proliferación y mantener la arquitectura epitelial. Merlin actúa como supresor tumoral al regular la inhibición por contacto y modular vías como Hippo-YAP/TAZ, la señalización de receptores tirosina cinasa y la dinámica del citoesqueleto, que influyen en la migración y la señalización mecánica. La pérdida o inactivación de NF2 altera estas redes de control del crecimiento, promoviendo una entrada aberrante en el ciclo celular y una señalización dependiente de la adhesión modificada. La disfunción de NF2 se asocia estrechamente con la neurofibromatosis de tipo 2 y con tumores deficientes en Merlin, como los schwannomas y los meningiomas, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la regulación del crecimiento y la mecanotransducción en células humanas.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.