Plasmide CRISPR d'Activation (r) neurexin I: sc-437279-ACT

La neurexine I est une molécule d’adhésion cellulaire présynaptique qui organise la formation et la maturation des synapses en se liant aux neuroligines et à d’autres partenaires synaptiques à travers la fente synaptique. Dans les neurones de rat, elle favorise la probabilité de libération des neurotransmetteurs, l’arrimage des vésicules synaptiques et le remodelage des circuits dépendant de l’activité, reliant la reconnaissance extracellulaire à l’échafaudage et à la signalisation intracellulaires. Les complexes médiés par les neurexines s’articulent avec le positionnement des canaux calciques et l’architecture de la zone active synaptique, influençant l’équilibre excitation/inhibition et la connectivité des réseaux. La dysrégulation des voies de la neurexine est associée à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude des synaptopathies et des phénotypes à l’échelle des circuits dans des systèmes modèles.

neurexin I Le plasmide d'activation CRISPR (r) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neurexin I Le plasmide d'activation CRISPR (r) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neurexin I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neurexin I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neurexin I dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.