Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400352-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Neuregulin-1/NRG1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Neuregulin-1/NRG1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NRG1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Neuregulin-1/NRG1: sc-393006
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400352-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Neuregulin-1/NRG1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400352-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NRG1 kodiert Neuregulin‑1, einen membrangebundenen und sezernierten EGF‑ähnlichen Liganden, der hauptsächlich über die Rezeptortyrosinkinasen ERBB3/ERBB4 signalisiert und dabei die PI3K–AKT‑ sowie die MAPK/ERK‑Signalwege aktiviert. Es reguliert die neuronale Entwicklung und synaptische Plastizität, die Interaktionen zwischen Schwann‑Zellen und Axonen während der peripheren Myelinisierung sowie Wachstum und Stressantworten von Kardiomyozyten. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen mit unterschiedlichen extrazellulären Domänen und Formen der juxtakrinen oder parakrinen Signalübertragung, wodurch eine kontextabhängige Steuerung von Differenzierungs‑, Migrations‑ und Überlebensprogrammen ermöglicht wird. Eine Fehlregulation der NRG1–ERBB‑Signalgebung wurde mit neuropsychiatrischen Phänotypen, veränderter Myelinisierung und einem onkogenen Umbau von Signalwegen in Verbindung gebracht, was NRG1 zu einem wertvollen Ziel für mechanistische Studien der Zellkommunikation und Rezeptorsignalgebung macht.
Neuregulin-1/NRG1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NRG1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NRG1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NRG1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NRG1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.