Plasmide CRISPR d'Activation (m) Neuregulin-1/NRG1: sc-431734-ACT

La neureguline-1 (NRG1) est un facteur de croissance de type EGF, à la fois associé à la membrane et sécrété, qui signale principalement via les tyrosine kinases réceptrices ERBB3/ERBB4 afin de réguler la communication cellule–cellule dans le système nerveux et d’autres tissus. Chez la souris, Nrg1 contribue au développement neuronal, à la maturation synaptique, à la myélinisation par les cellules de Schwann et aux interactions neurogliales, en s’intégrant aux voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et à des programmes transcriptionnels en aval qui façonnent la différenciation et la survie. L’activité de NRG1 influence la formation et la plasticité des circuits et est largement utilisée comme point d’entrée moléculaire pour étudier la signalisation axone–glie et le remodelage dépendant de l’activité. Une dérégulation de la signalisation Nrg1/ERBB a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des altérations de la biologie des nerfs périphériques, ce qui appuie sa pertinence dans des modèles mécanistiques de maladie.

Neuregulin-1/NRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nrg1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neuregulin-1/NRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nrg1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nrg1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neuregulin-1/NRG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nrg1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neuregulin-1/NRG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neuregulin-1/NRG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nrg1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.