Neuregulin-1/NRG1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431734-ACT

Neuregulin-1 (NRG1) ist ein membranständiger und sezernierter, EGF-ähnlicher Wachstumsfaktor, der vor allem über die ERBB3/ERBB4-Rezeptor-Tyrosinkinasen signalisiert, um die Zell-Zell-Kommunikation im Nervensystem und in anderen Geweben zu regulieren. Bei der Maus trägt Nrg1 zur neuronalen Entwicklung, synaptischen Reifung, Myelinisierung durch Schwann-Zellen sowie zu neuron-glialen Interaktionen bei und ist in PI3K–AKT-, MAPK/ERK- und nachgeschaltete transkriptionelle Programme eingebunden, die Differenzierung und Überleben prägen. Die NRG1-Aktivität beeinflusst die Schaltkreisbildung und Plastizität und wird häufig als molekularer Zugangspunkt genutzt, um Axon-Glia-Signalgebung und aktivitätsabhängiges Remodeling zu untersuchen. Eine Fehlregulation der Nrg1/ERBB-Signalgebung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie mit veränderter peripherer Nervenbiologie in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Krankheitsmodelle unterstreicht.

Neuregulin-1/NRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nrg1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neuregulin-1/NRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nrg1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nrg1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neuregulin-1/NRG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nrg1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neuregulin-1/NRG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neuregulin-1/NRG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nrg1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.