Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Neuralized-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-407560-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Neuralized-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Neuralized-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Neuralized-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NEURL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Neuralized-2: sc-398195
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Neuralized-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407560-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Neuralized-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407560-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEURL2 kodiert Neuralized-2, eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die die Ubiquitinierung und den Abbau spezifischer Membran- und Signalproteine fördert und dadurch den Rezeptortransport (Trafficking) und die Dauer von Signalübertragung mitprägt. In menschlichen Zellen wurde Neuralized-2 mit der Regulation von Komponenten des Notch-Signalwegs sowie allgemein mit der Kontrolle von Zellschicksalsentscheidungen, Polarität und Differenzierungsprogrammen durch das Ubiquitin-Proteasom-System in Verbindung gebracht. Über diese Mechanismen kann die NEURL2-Aktivität die Homöostase von Epithelgeweben und kontextabhängige transkriptionelle Outputs nachgeschalteter Entwicklungssignale beeinflussen. Eine veränderte NEURL2-Expression oder eine Störung ubiquitinvermittelter Signalgebung wurde in der Literatur mit krebsassoziierten Phänotypen und Fehlregulation von Signalwegen in Zusammenhang gebracht, was die Relevanz von NEURL2 für mechanistische Studien zu Signalübertragung und Zellzustandsübergängen unterstreicht.
Neuralized-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NEURL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NEURL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NEURL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NEURL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.