Neurabin-II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403741-ACT

PPP1R9B kodiert Neurabin‑II, ein im Gehirn angereichertes, F‑Aktin‑bindendes Scaffold‑Protein, das Proteinphosphatase 1 (PP1) an zytoskelettale und synaptische Signalgebungskomplexe rekrutiert. Über Interaktionen, die Aktin‑Dynamik und Phosphoregulation organisieren, trägt Neurabin‑II zur Umgestaltung dendritischer Dornen (dendritic spines), zum Neuritenauswuchs sowie zur Modulation der neuronalen Erregbarkeit und der Rezeptorsignalgebung bei. Diese Funktionen verknüpfen PPP1R9B mit Signalwegen, die synaptische Plastizität, die Architektur des Zytoskeletts und die Signaltransduktion in der postsynaptischen Dichte steuern. Eine fehlregulierte PP1‑Rekrutierung und eine aktinabhängige synaptische Organisation sind relevant für neurobiologische Forschungsfelder, darunter kognitive und neuropsychiatrische Phänotypen, bei denen veränderte neuronale Konnektivität und Signalübertragung häufige mechanistische Leitmotive sind.

Neurabin-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPP1R9B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurabin-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPP1R9B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPP1R9B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurabin-II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPP1R9B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurabin-II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurabin-II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPP1R9B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.