Neu1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401488

Übersicht

NEU1 kodiert die lysosomale Neuraminidase 1 (Neu1), eine Sialidase, die terminale Sialinsäuren von Glykoproteinen und Glykolipiden entfernt, um den lysosomalen Katabolismus und den Umsatz von Zelloberflächenrezeptoren zu regulieren. Neu1 wirkt im Verbund mit dem Komplex aus Schutzprotein/Cathepsin A, um die Aktivität lysosomaler Enzyme aufrechtzuerhalten und endozytisches Trafficking sowie autophagiegekoppelte Abbauprozesse zu beeinflussen. Durch die Modulation des Sialylierungszustands membranständiger und sezernierter Proteine beeinflusst Neu1 Immun-Signalgebung, Adhäsion und den Umbau der extrazellulären Matrix. Eine fehlregulierte NEU1-Aktivität wird mit lysosomalen Speichererkrankungen und weiter gefassten Prozessen wie Neuroinflammation und tumorassoziierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, was NEU1 für mechanistische Studien zur glyko-lysosomalen Homöostase relevant macht.

Das Neu1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NEU1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NEU1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NEU1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Neu1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NEU1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Neu1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NEU1-Exone abzielen, die für die Neu1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NEU1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Neu1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Neu1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NEU1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Neu1 HDR-Plasmid (h) und Neu1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NEU1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NEU1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.