Plásmido CRISPR de Activación (h) Neu1: sc-401488-ACT

NEU1 codifica la neuraminidasa 1 humana (Neu1), una sialidasa lisosomal que elimina los ácidos siálicos terminales de glicoproteínas y glicolípidos, modulando el catabolismo lisosomal y la composición de los glicanos en la superficie celular. Neu1 actúa dentro del complejo multienzimático lisosomal y contribuye al recambio y al tráfico de sustratos sialilados, influyendo en la señalización de receptores y en las vías endocíticas mediante la regulación de la desialilación de proteínas. La alteración de la actividad de NEU1 se asocia con una homeostasis lisosomal perturbada y con patrones de glicosilación aberrantes que afectan la señalización inflamatoria y los procesos de adhesión celular. La disfunción de NEU1 se relaciona con fenotipos de enfermedades de almacenamiento lisosomal, lo que convierte a Neu1 en una diana relevante para estudiar mecanismos dependientes de la sialilación en células humanas.

Neu1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NEU1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Neu1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NEU1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NEU1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Neu1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NEU1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Neu1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Neu1 en células tumorales con expresión de NEU1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.