NEPH3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406190

Übersicht

KIRREL2 kodiert NEPH3, ein Adhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie, das an spezialisierten Zell-Zell-Kontaktstellen angereichert ist und dort die Bildung und Aufrechterhaltung schlitzdiaphragmaähnlicher Strukturen sowie die Organisation epithelialer Barrieren unterstützt. NEPH3 ist an kontaktabhängiger Signalübertragung und Zytoskelett-Umbau beteiligt, indem es mit Gerüstproteinen interagiert, die die Aktindynamik und die Stabilität von Zellkontaktkomplexen koordinieren. In nierenspezifischen Kontexten werden NEPH3-assoziierte Komplexe mit der Podocyten-Architektur, der Integrität der Filtrationsbarriere und zellulären Reaktionen auf mechanischen oder entzündlichen Stress in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation von Adhäsionsnetzwerken der NEPH-Familie wurde mit glomerulärer Pathologie und veränderter epithelialer Differenzierung assoziiert, wodurch KIRREL2 ein nützliches Ziel für die Untersuchung von junctionaler Signalübertragung und Gewebehomöostase darstellt.

Das NEPH3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIRREL2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIRREL2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIRREL2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NEPH3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIRREL2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NEPH3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIRREL2-Exone abzielen, die für die NEPH3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIRREL2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NEPH3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NEPH3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIRREL2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NEPH3 HDR-Plasmid (h) und NEPH3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIRREL2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIRREL2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.