Nek7 Plasmide Double Nickase (h): sc-405218-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nek7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nek7 Double Nickase Plasmid (h) e il Nek7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NEK7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nek7 Antibody (B-5): sc-393539
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nek7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nek7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEK7 codifica la chinasi serina/treonina Nek7, una chinasi correlata a NIMA che regola la funzione del centrosoma, l’assemblaggio del fuso mitotico e la progressione attraverso la mitosi coordinando la dinamica dei microtubuli e i checkpoint del ciclo cellulare. Nek7 partecipa anche alla segnalazione in risposta allo stress, inclusa la regolazione dell’attivazione dell’inflammasoma NLRP3 e delle conseguenti risposte infiammatorie, collegando il controllo della divisione cellulare alle vie dell’immunità innata. Un’attività o un’espressione deregolata di NEK7 è stata associata a proliferazione aberrante e instabilità genomica, rendendolo rilevante per lo studio della biologia tumorale e delle patologie guidate dal ciclo cellulare. Di conseguenza, NEK7 viene spesso indagato in modelli di regolazione mitotica, rimodellamento del citoscheletro e fenotipi cellulari associati all’infiammazione.
Nek7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEK7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEK7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEK7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEK7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.