Plásmido Doble Nickase (m) Nek2: sc-421853-NIC

Nek2 (quinasa 2 relacionada con NIMA) es una quinasa de serina/treonina que coordina la separación de los centrosomas, el ensamblaje del huso bipolar y la segregación correcta de los cromosomas durante la mitosis. En células de ratón, la actividad de Nek2 se integra con el control del ciclo celular y del punto de control del huso al regular componentes centrosomales y la dinámica de los microtúbulos, influyendo así en la progresión a través de G2/M y en la fidelidad mitótica. La expresión desregulada o la actividad quinasa alterada de Nek2 se asocia con amplificación de centrosomas, aneuploidía e inestabilidad genómica, procesos que se investigan con frecuencia en modelos de trastornos proliferativos y del neurodesarrollo. Como quinasa asociada al centrosoma, Nek2 se estudia habitualmente en vías que gobiernan la entrada en mitosis, la organización del huso y el acoplamiento entre cilios y ciclo celular.

Nek2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nek2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nek2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nek2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nek2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.