Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek2 (m): sc-421853

Présentation

Nek2 (NIMA related kinase 2) est une kinase sérine/thréonine localisée aux centrosomes, qui régule la séparation des centrosomes, l’assemblage du fuseau mitotique et la ségrégation fidèle des chromosomes pendant la mitose. Dans les cellules de souris, l’activité de Nek2 coordonne la progression du cycle cellulaire en phosphorylant des substrats centrosomaux et en modulant la dynamique des microtubules, contribuant ainsi à la stabilité du génome. Une signalisation de Nek2 dérégulée a été associée à l’amplification des centrosomes, à l’aneuploïdie et à une altération du contrôle de la prolifération, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la biologie tumorale et de l’intégrité du point de contrôle mitotique. Nek2 interagit également avec des voies impliquées dans les réponses aux dommages de l’ADN et la dynamique des cils, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les réseaux de signalisation liés à la division cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nek2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nek2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nek2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nek2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nek2 pour l'étude de la signalisation de Nek2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nek2 essentiels à la fonction de Nek2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nek2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nek2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nek2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nek2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nek2 plasmide HDR (m) et le Nek2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nek2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nek2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.