Nek1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421852

Descripción general

Nek1 (quinasa 1 relacionada con NIMA) es una quinasa de serina/treonina que coordina aspectos clave del control del ciclo celular, la homeostasis del centrosoma y de los cilios, y procesos asociados a los microtúbulos. En células de ratón, Nek1 se ha relacionado con la señalización y la reparación del daño en el ADN, contribuyendo a la estabilidad del genoma mediante la regulación de vías de control (checkpoints) y de reparación. Sus funciones se solapan con la ciliogénesis y la organización del citoesqueleto, vinculando la actividad de Nek1 con programas de desarrollo y de mantenimiento tisular. La desregulación de vías asociadas a Nek1 se ha implicado en la patobiología relacionada con los cilios y en mecanismos relevantes para la neurodegeneración, lo que lo convierte en una diana útil para analizar respuestas al estrés y fenotipos de la arquitectura celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nek1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nek1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nek1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nek1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nek1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nek1 para la investigación de la señalización de Nek1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nek1 críticos para la función de Nek1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nek1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nek1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nek1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nek1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nek1 (m) y el plásmido HDR Nek1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nek1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nek1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.