Plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDL2 (h): sc-410607

Présentation

HECW2 code pour NEDL2, une ligase E3 ubiquitine de type HECT qui régule le renouvellement des protéines et la signalisation via la modification, dépendante de l’ubiquitine, de substrats cellulaires clés. L’activité de NEDL2 contribue à la protéostasie et influence des voies liées au développement neuronal, à la fonction synaptique et à des programmes transcriptionnels sensibles au stress, en modulant la stabilité et la disponibilité de protéines régulatrices. Une perturbation ou une régulation altérée de HECW2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et est étudiée dans le contexte d’une signalisation de l’ubiquitine aberrante pouvant affecter le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et l’intégrité du génome. En tant que composant de la voie de l’ubiquitine, NEDL2 est pertinent pour des études mécanistiques sur la reconnaissance des substrats, la spécificité des réseaux E2/E3 et les effets en aval sur des nœuds de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDL2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HECW2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HECW2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HECW2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NEDL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HECW2 pour l'étude de la signalisation de NEDL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HECW2 essentiels à la fonction de NEDL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HECW2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NEDL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NEDL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HECW2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NEDL2 plasmide HDR (h) et le NEDL2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HECW2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HECW2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.