NEDL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410607

Übersicht

HECW2 kodiert NEDL2, eine E3-Ubiquitin-Ligase vom HECT-Typ, die den Proteinumsatz und die Signalübertragung durch ubiquitinabhängige Modifikation zentraler zellulärer Substrate reguliert. Die Aktivität von NEDL2 trägt zur Proteostase bei und beeinflusst Signalwege, die mit neuronaler Entwicklung, synaptischer Funktion und stressantwortlichen Transkriptionsprogrammen verknüpft sind, indem sie die Stabilität und Verfügbarkeit regulatorischer Proteine mitbestimmt. Eine Störung oder veränderte Regulation von HECW2 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird im Kontext aberranter Ubiquitin-Signalgebung untersucht, die die Zellzykluskontrolle, Differenzierung und Genomintegrität beeinträchtigen kann. Als Komponente des Ubiquitin-Systems ist NEDL2 relevant für mechanistische Studien zur Substraterkennung, zur Spezifität von E2/E3-Netzwerken und zu nachgelagerten Effekten auf Signal-Knotenpunkte.

Das NEDL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HECW2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HECW2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HECW2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NEDL2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HECW2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NEDL2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HECW2-Exone abzielen, die für die NEDL2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HECW2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NEDL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NEDL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HECW2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NEDL2 HDR-Plasmid (h) und NEDL2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HECW2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HECW2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.