NEDL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406027

Übersicht

HECW1 kodiert die humane E3-Ubiquitin-Protein-Ligase NEDL1, ein HECT-Domänen-Enzym, das die Übertragung von Ubiquitin auf Substratproteine katalysiert und so deren Stabilität sowie die Signalweiterleitung reguliert. NEDL1 ist an ubiquitinabhängigen Proteostase-Wegen beteiligt, die den Proteinumsatz, Stressantworten und Entscheidungen über das Zellschicksal beeinflussen, und wird mit der Modulation apoptotischer Signalwege sowie der neuronalen Homöostase in Verbindung gebracht. Durch selektive Ubiquitinierung kann NEDL1 nachgelagerte Transkriptionsprogramme und Qualitätskontrollnetzwerke formen, die bei Neurodegeneration und krebsassoziierten zellulären Phänotypen häufig gestört sind. Daher ist HECW1 von Interesse, um die Verschaltung von Ubiquitin-Signalwegen und die substratspezifische Regulation in humanen Zellsystemen zu untersuchen.

Das NEDL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HECW1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HECW1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HECW1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NEDL1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HECW1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NEDL1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HECW1-Exone abzielen, die für die NEDL1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HECW1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NEDL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NEDL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HECW1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NEDL1 HDR-Plasmid (h) und NEDL1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HECW1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HECW1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.