Plásmido Doble Nickase (h) NDUFS4: sc-405184-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NDUFS4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NDUFS4 (h) y el plásmido de doble nickasa NDUFS4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NDUFS4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NDUFS4 Anticuerpo (A-7): sc-514002
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NDUFS4 | sc-405184-NIC | 20 µg | $410.00 |
NDUFS4 codifica una subunidad accesoria del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) que favorece el ensamblaje y la estabilidad del complejo I dentro de la membrana interna mitocondrial. Al permitir una transferencia eficiente de electrones desde el NADH hacia la ubiquinona, NDUFS4 contribuye a la fosforilación oxidativa, al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y a la regulación del equilibrio redox celular. La alteración de la función de NDUFS4 se asocia con una actividad deficiente del complejo I, un manejo modificado de las especies reactivas de oxígeno y una remodelación metabólica que puede afectar a las redes de señalización bioenergética. Las variantes en NDUFS4 se relacionan con fenotipos de deficiencia del complejo I mitocondrial, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la disfunción mitocondrial y las respuestas al estrés.
NDUFS4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NDUFS4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NDUFS4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NDUFS4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NDUFS4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.