NDRG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421841

Panoramica

Ndrg1 codifica NDRG1, una proteina citoplasmatica indotta dallo stress cellulare e da segnali di differenziamento, che contribuisce alla regolazione della crescita cellulare, dell’impegno di linea e delle risposte all’ipossia. Nelle cellule murine, NDRG1 è stata collegata a vie che governano l’omeostasi del ferro, il traffico vescicolare e l’organizzazione del citoscheletro, con effetti dipendenti dal contesto sui programmi di proliferazione e motilità. NDRG1 è inoltre associata alla biologia della mielina nel sistema nervoso periferico ed è stata studiata in modelli di neurodegenerazione e di neuropatie demielinizzanti. Alterazioni dell’espressione di Ndrg1 sono state ulteriormente investigate nella biologia dei tumori e in fenotipi legati alla metastasi, a supporto della sua rilevanza negli studi di segnalazione e adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NDRG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ndrg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ndrg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ndrg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NDRG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ndrg1 per lo studio della segnalazione di NDRG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ndrg1 critici per la funzione di NDRG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ndrg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NDRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NDRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ndrg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NDRG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NDRG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ndrg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ndrg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.