Plasmide CRISPR d'Activation (h) NDRG1: sc-402294-ACT

NDRG1 (N-myc downstream regulated gene 1) code une protéine cytoplasmique induite en réponse au stress, impliquée dans la différenciation cellulaire, l’homéostasie des lipides et du fer, ainsi que la modulation des réseaux de transduction du signal. NDRG1 est régulé par l’hypoxie, p53 et la signalisation oncogénique de MYC, et a été associé à des voies contrôlant la prolifération, la dynamique épithélio-mésenchymateuse et les réponses au stress cellulaire. En biologie humaine, une expression altérée de NDRG1 a été associée à la progression tumorale et au comportement métastatique dans de multiples contextes tissulaires, ainsi qu’à des phénotypes de neuropathie périphérique héréditaire. Ces caractéristiques font de NDRG1 un nœud utile pour disséquer les programmes transcriptionnels qui relient le stress microenvironnemental à des changements d’état cellulaire.

NDRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NDRG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NDRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NDRG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NDRG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NDRG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NDRG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NDRG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NDRG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NDRG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.