NDRG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402294-ACT

NDRG1 (N-myc downstream regulated gene 1) kodiert ein stressresponsives zytoplasmatisches Protein, das an der zellulären Differenzierung, der Lipid- und Eisenhomöostase sowie der Modulation von Signaltransduktionsnetzwerken beteiligt ist. NDRG1 wird durch Hypoxie, p53 und onkogenes MYC-Signaling reguliert und mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Proliferation, epithelial-mesenchymale Dynamiken und Reaktionen auf zellulären Stress steuern. In der Humanbiologie wurde eine veränderte NDRG1-Expression mit Tumorprogression und metastatischem Verhalten in unterschiedlichen Gewebekontexten sowie mit erblichen peripheren Neuropathie-Phänotypen assoziiert. Diese Eigenschaften machen NDRG1 zu einem hilfreichen Knotenpunkt, um Transkriptionsprogramme zu untersuchen, die mikroenvironmentalen Stress mit Veränderungen des Zellzustands koppeln.

NDRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NDRG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NDRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NDRG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NDRG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NDRG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NDRG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NDRG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NDRG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NDRG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.