Ndn CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421839-ACT

Das Mausgen **Ndn** kodiert Necdin, ein Protein der MAGE-Familie mit bedeutenden Funktionen bei der neuronalen Differenzierung, dem Überleben von Neuronen und der Aufrechterhaltung postmitotischer Zustände. Necdin ist an transkriptionellen und zellzyklusregulatorischen Netzwerken beteiligt, indem es Interaktionen mit Faktoren wie Proteinen der E2F-Familie und p53-assoziierten Signalwegen moduliert und so mit der Kontrolle von Proliferation und Stressantworten in neuralen Zelllinien verknüpft ist. Außerdem steht es im Zusammenhang mit der neuroendokrinen Entwicklung und hypothalamischen Signalprozessen, die den Energiehaushalt und die Reproduktionsphysiologie beeinflussen. Eine Fehlregulation der **Ndn**-Expression wird mit imprintingbedingten neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und häufig im Kontext der Biologie der Prader-Willi-Region sowie damit verbundener neuronaler Funktionsstörungen untersucht.

Ndn Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ndn-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ndn Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ndn-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ndn-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ndn-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ndn-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ndn-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ndn-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ndn-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.